留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究

郑志鸿 章超桦 林海生 曾少葵 秦小明 曹文红 陈海源

郑志鸿, 章超桦, 林海生, 曾少葵, 秦小明, 曹文红, 陈海源. 方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究[J]. 仁和测试, 2020, 37(3): 460-468, 479. doi: 10.7507/1001-5515.201908008
引用本文: 郑志鸿, 章超桦, 林海生, 曾少葵, 秦小明, 曹文红, 陈海源. 方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究[J]. 仁和测试, 2020, 37(3): 460-468, 479. doi: 10.7507/1001-5515.201908008
Zhihong ZHENG, Chaohua ZHANG, Haisheng LIN, Shaokui ZENG, Xiaoming QIN, Wenhong CAO, Haiyuan CHEN. Wound-healing acceleration of mice skin by Sipunculus nudus extract and its mechanism[J]. Rhhz Test, 2020, 37(3): 460-468, 479. doi: 10.7507/1001-5515.201908008
Citation: Zhihong ZHENG, Chaohua ZHANG, Haisheng LIN, Shaokui ZENG, Xiaoming QIN, Wenhong CAO, Haiyuan CHEN. Wound-healing acceleration of mice skin by Sipunculus nudus extract and its mechanism[J]. Rhhz Test, 2020, 37(3): 460-468, 479. doi: 10.7507/1001-5515.201908008

方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究

doi: 10.7507/1001-5515.201908008
基金项目: 广东省教育厅创新强校工程项目(GDOU2017052606);湛江市科技计划项目(2019A01022);广东普通高等学校水产品高值化加工与利用创新团队项目(GDOU2016030503)
详细信息
    通讯作者:

    章超桦,Email:zhangch2@139.com

    林海生,Email:haishenglin@163.com

Wound-healing acceleration of mice skin by Sipunculus nudus extract and its mechanism

Funds: Department of Education of Guangdong Province; Science and Technology Bureau of Zhanjiang; Guangdong Ocean University
More Information
  • 摘要: 为探讨方格星虫水提物(SNE)促进小鼠皮肤创伤愈合的活性及其机制,测定 SNE 的止血作用,建立小鼠全皮层创伤模型,观察伤口愈合形态并测定愈合率;采用苏木素-伊红(HE)、马森(Masson)染色、透射电镜(TEM)观察创面的组织结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞因子及其相关蛋白的表达水平。结果显示,SNE 具有止血作用,能明显提高小鼠创伤愈合率并缩短掉痂时间(P < 0.05)。研究中,SNE 组小鼠表皮生长完全、创面毛细血管和胶原纤维增生明显优于空白(NT)组;第 7 d,SNE 明显降低白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平( P < 0.05);第 28 d,相比于 NT 组,SNE 组的 Smad7 表达水平上调,TGF-β II 型受体(TGF-βRII)、I 型胶原蛋白(COL1A1)和 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平下调,差异具有统计学意义( P < 0.05),而与云南白药组(PC 组)的差异无统计学意义( P > 0.05)。结果表明,SNE 具有促进伤口愈合活性和抑制增生性瘢痕生成作用,其作用机制与止血、调节炎症因子、促进胶原纤维重塑以及调控 TGF-β/Smads 信号通路传导有密切关联。SNE 作为皮肤创伤修复和抑制瘢痕制剂,具有潜在的临床应用价值。
  • 图  1  SNE 对小鼠尾部出血时间的影响(n = 6,* P < 0.05, ** P < 0.01)

    Figure  1.  Effects of SNE treatment on tail bleeding time in mice (n = 6, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  2  NT 组、SNE 组和 PC 组的伤口创面愈合情况

    Figure  2.  The wound healing of NT,SNE and PC group

    图  3  SNE 对创伤愈合率的影响(n = 7,* P < 0.05 ** P < 0.01,SNE 组与 NT 组比)

    Figure  3.  Effect of SNE on wound closure (n = 7, Compared with the NT group, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  4  掉痂所用的时间(n = 17,* P < 0.05,** P < 0.01)

    Figure  4.  Time of scab removal (n = 17, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  5  小鼠皮肤创面 TNF-α、IL-1β 和 TGF-β1 的表达水平(n = 4,* P < 0.05,** P < 0.01)

    Figure  5.  Expression of TNF-α,IL-1β and TGF-β1 in wound of mice skin (n = 4, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  6  组织学分析创面表皮的愈合质量

    Figure  6.  Histological analysis of the healing quality of wound epidermis

    图  7  创面的表皮厚度指数(n = 4,* P < 0.05,** P < 0.01)

    Figure  7.  Epidermal thickness index of wound epidermis (n = 4, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  8  创面的表皮薄厚比(n = 4,* P < 0.05,** P < 0.01)

    Figure  8.  Thin/thick ratio of epithelial thickness of wound epidermis (n = 4, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  9  Masson 染色切片分析创口真皮位置胶原沉积和重组情况

    Figure  9.  Analysis of Masson-stained sections for collagen deposition and recombination at the wound dermal

    图  10  小鼠皮肤创面的 COL1A1 的表达(n = 4,* P < 0.05, ** P < 0.01)

    Figure  10.  Expression of type I collagen in wound of mice skin (n = 4, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    图  11  伤后 21 d 创口胶原纤维分布

    Figure  11.  Distribution of collagen fibers at 21 days post-wounding

    图  12  TGF-β/Smads 信号通路几种相关的因子的表达(n = 4,* P < 0.05,** P < 0.01)

    Figure  12.  Expression of several factors related to TGF-β / Smads signaling pathway (n = 4, * P < 0.05, ** P < 0.01)

    表  1  qRT-PCR 引物

    Table  1.   Primers used for qRT-PCR analysis

    基因 上游引物 下游引物
    GADPH CAGGAGGCATTGCTGATGAT GAAGGCTGGGGCTCATTT
    TNF-α GGTCAATCTGCCCAAGTA CACCCATTCCCTTCACAG
    IL-1β TATGGGCTGGACTGTTTCTAATGC TTCTTGTGACCCTGAGCGACCT
    TGF-β1 CCGCAACAACGCCATCTAT CCAAGGTAACGCCAGGAAT
    COL1A1 ACGCCATCAAGGTCTACTGC GAATCCATCGGTCATGCTCT
    α-SMA AGACATCAGGGAGTAATGGTTG GAAGCTCGTTATAGAAAGAGTGG
    TGF-βRII TGAGAAGCCGCATGAAGT AGAGTGAAGCCGTGGTAGGT
    Smad7 TTTACAACCGCAGCAGTTAC GGCTGTAGGCTTTCTCATAGT
    下载: 导出CSV
  • [1] 张天蔚, 刘方, 田卫群. 促皮肤创面愈合新型敷料研究现状与进展. 生物医学工程学杂志, 2019, 36(6): 1055-1059, 1068.
    [2] Greaves N S, Ashcroft K J, Baguneid M, et al. Current understanding of molecular and cellular mechanisms in fibroplasia and angiogenesis during acute wound healing. J Dermatol Sci, 2013, 72(03): 206-217. doi:  10.1016/j.jdermsci.2013.07.008
    [3] Enoch. S, Leaper D J. Basic science of wound healing. Surgery (Oxford), 2008, 26(02): 31-37. doi:  10.1016/j.mpsur.2007.11.005
    [4] 欧阳茜茜. 壳聚糖/罗非鱼多肽生物医用材料烫伤修复及止血性能研究. 湛江: 广东海洋大学, 2019.
    [5] Gurtner G C, Werner S, Barrandon Y, et al. Wound repair and regeneration. Nature, 2008, 453(7193): 314-321. doi:  10.1038/nature07039
    [6] 于蓉, 岑瑛. TGF-β1/Smad3 信号转导通路与创伤后瘢痕形成. 中国修复重建外科杂志, 2012, 26(3): 330-335.
    [7] 张桂和, 李理, 赵谋明, 等. 方格星虫营养成分分析及抗疲劳作用研究. 营养学报, 2008, 30(3): 318-320. doi:  10.3321/j.issn:0512-7955.2008.03.024
    [8] 陈晓华, 于攀, 李世荣, 等. 局部应用. L-精氨酸对糖尿病小鼠创面愈合的影响. 组织工程与重建外科杂志, 2009, 5(4): 205-207. doi:  10.3969/j.issn.1673-0364.2009.08.007
    [9] 李娜. 星虫多糖的抗辐射作用研究. 上海: 上海海洋大学, 2016.
    [10] 孙瑞坤, 章超桦, 曾少葵, 等. 方格星虫酶解工艺优化及酶解物免疫活性. 广东海洋大学学报, 2018, 38(3): 54-61. doi:  10.3969/j.issn.1673-9159.2018.03.009
    [11] 夏乾峰, 谭河林, 覃西, 等. 方格星虫多糖抗菌活性的初步研究. 中国热带医学, 2007, 7(12): 2192-2193. doi:  10.3969/j.issn.1009-9727.2007.12.007
    [12] Zhang C X, Dai Z R, Cai Q X, et al. Anti-inflammatory and anti-nociceptive activities of Sipunculus nudus L. extract. J Ethnopharmacol, 2011, 137(03): 1177-1182. doi:  10.1016/j.jep.2011.07.039
    [13] 苏秀榕, 孙蓓, 李研妍, 等. 星虫胶原蛋白的生物学特性研究. 天然产物研究与开发, 2009, 21(1): 48-52. doi:  10.3969/j.issn.1001-6880.2009.01.011
    [14] 郑志鸿, 章超桦, 林海生, 等. 方格星虫酶解物对小鼠皮肤创伤修复的作用. 广东海洋大学学报, 2020, 40(1): 97-103. doi:  10.3969/j.issn.1673-9159.2020.01.013
    [15] 贺争鸣, 里根平, 朱德生, 等. 实验动物护理和使用指南. 北京: 科学出版社, 2016: 112-468.
    [16] 章超桦, 铃木健, 吉江由美子. 沙虫干呈味及功能性成分研究. 湛江海洋大学学报, 2000, 20(02): 24-27.
    [17] 李伟, 姜玉新, 陆晓华, 等. 牛磺酸对 STZ 诱导的糖尿病大鼠伤口愈合的影响. 皖南医学院学报, 2019, 38(6): 515-518. doi:  10.3969/j.issn.1002-0217.2019.06.002
    [18] 胡笑丛. 星虫微量元素含量的测定. 水产科学, 2005, 24(6): 12-14. doi:  10.3969/j.issn.1003-1111.2005.06.005
    [19] 崔飞艳, 王斌, 魏立, 等. 藻酸钙敷料的促凝血机制. 中国组织工程研究, 2015, 19(47): 7681-7686.
    [20] 林雁鸿, 周清清, 李春霖, 等. 创伤修复机制和治疗进展. 中国现代药物应用, 2019, 13(23): 230-232.
    [21] Eming S A, Krieg T, Davidson J M. Inflammation in wound repair: molecular and cellular mechanisms. J Invest Dermatol, 2007, 127(3): 514-525. doi:  10.1038/sj.jid.5700701
    [22] 林康, 苏海燕, 虞庆, 等. 苏拉明通过抑制纤维增生和炎症反应减轻小鼠的瘢痕增生. 中国病理生理杂志, 2019, 35(11): 2070-2077. doi:  10.3969/j.issn.1000-4718.2019.11.022
    [23] Redd M J, Cooper L, Wood W, et al. Wound healing and inflammation: embryos reveal the way to perfect repair. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci, 2004, 359(1445): 777-784. doi:  10.1098/rstb.2004.1466
    [24] Roh J L, Lee J, Kim E H, et al. Plasticity of oral mucosal cell sheets for accelerated and scarless skin wound healing[J]. Oral Oncol, 2017, 75: 81-88. doi:  10.1016/j.oraloncology.2017.10.024
    [25] Arno A I, Gauglitz G G, Barret J P, et al. New molecular medicine-based scar management strategies. Burns, 2014, 40(4): 539-551. doi:  10.1016/j.burns.2013.11.010
    [26] Györfi A H, Matei A E, Distler J H W. Targeting TGF-β signaling for the treatment of fibrosis. Matrix Biol, 2018, 68-69:8-27. doi:  10.1016/j.matbio.2017.12.016
    [27] Nolte M, Margadant C. Controlling immunity and inflammation through integrin-dependent regulation of TGF-β. Trends in Cell Biol, 2020, 30(1): 49-59. doi:  10.1016/j.tcb.2019.10.002
    [28] Weiskirchen R, Weiskirchen S and Tacke F. Organ and tissue fibrosis: molecular signals, cellular mechanisms and translational implications. Molecular Aspects of Medicine, 2019, 65:2-15. doi:  10.1016/j.mam.2018.06.003
    [29] 涂鹏程, 郭杨, 郑苏阳, 等. 关节软骨修复机制中相关信号分子的研究进展. 生物医学工程学杂志, 2019, 36(2): 343-348.
    [30] Pratsinis H, Mavrogonatou E, Kletsas D. Scarless wound healing: from development to senescence. Adv Drug Delivery Rev, 2019,146: 325-343. doi:  10.1016/j.addr.2018.04.011
    [31] Tang B, Zhu B, Liang Y Y, et al. Asiaticoside suppresses collagen expression and TGF-beta/Smad signaling through inducing Smad7 and inhibiting TGF-beta RI and TGF-beta RII in keloid fibroblasts. Arch Dermatol Res, 2011, 303(8): 563-572. doi:  10.1007/s00403-010-1114-8
    [32] 韩士超, 张健, 李珍珍, 等. TNFα 诱导蛋白 3 在人真皮成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化中的作用及机制. 中国医师杂志, 2019, 21(4): 495-498, 502. doi:  10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2019.04.004
    [33] Pan Xiaohua, Li Jiahong, Tu Xing, et al. Lysine-specific demethylase-1 regulates fibroblast activation in pulmonary fibrosis via TGF-β1/Smad3 pathway. Pharmacol Res, 2020,152: 104592. doi:  10.1016/j.phrs.2019.104592
  • 加载中
图(12) / 表(1)
计量
  • 文章访问数:  17
  • HTML全文浏览量:  21
  • PDF下载量:  0
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2019-08-02
  • 修回日期:  2020-03-31
  • 刊出日期:  2020-03-17

目录

    /

    返回文章
    返回